背景[1-3]
3-羟氨甲酸双加氧酶抗体是可以特异性结合3-羟氨甲酸双加氧酶的抗体蛋白。HAAO(3-羟基邻氨基甲酸3,4-二加氧酶)是一种蛋白质编码基因。其相关途径包括色氨酸的代谢和超途径。3-羟基邻氨基甲酸3,4-双加氧酶是一种单体胞质蛋白,属于含有非血红素亚铁的分子内双加氧酶家族。
4-它广泛分布于周围器官,例如肝和肾,并且在中枢神经系统中也少量存在。HAAO催化从3-羟基邻氨基甲酸合成喹啉酸(QUIN)。QUIN是一种兴奋毒素,其毒性由其激活谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸受体的能力介导。QUIN的脑水平升高可能参与神经系统疾病和炎症性疾病的发病机制。3-羟邻氨基甲酸双加氧(3-Hydroxyanthranilic acid 3,4-dioxygenase,HAO)是NAD合成途径中关键调控酶。通常,正常细胞是通过三种生化途径中的任何一种来制造NAD。简单说,细胞内NAD+池决定于产生和消耗的平衡,NAD+的产生主要依赖于烟酰胺循环。此外还有多种合成NAD+途径,如有一种用色氨酸为原料的从头合成途径。
应用[4][5]
用于血红素和西罗血红素分支合成关键酶的结构生物学研究
玉米尿卟啉原甲基化酶的功能片段的确定依赖于S-腺苷甲硫氨酸的尿卟啉原甲基化酶(S-adenosyl-L-methionine:uroporphyrinogen methyltransferase,SUMT)是微生物合成西罗血红素、血红素d1、F430因子和维生素B12等卟吩烷类化合物的重要调控酶,植物中SUMT负责西罗血红素生物合成的调控。SUMT催化尿卟啉原Ⅲ在C2和C7位的甲基化,大肠杆菌重组表达的SUMT会在细胞中积累西罗叶绿三酸和过甲基化产物三甲基咕啉,它们在紫外光下产生强烈红色荧光,这种性质可用于检测SUMT在重组系统的体内酶活。利用不同的限制性内酶切,将编码玉米SUMT的基因切成不同片段,分别插入不同的表达载体中,表达的蛋白分别是玉米SUMT,含有叶绿体导肽的SUMT前体,切除SUMT的N端S-腺苷甲硫氨酸结合模块的截头突变体,和切除SUMT的C端52个氨基酸残基的截尾突变体。血红素,西罗血红素和NAD生物合成的酶的纯化及结晶生物中血红素和西罗血红素是个多功能分子,参与它的生物的酶的结构和功能的研究近年来有很大进展。
3-羟邻氨基甲酸双加氧酶(3-Hydroxyanthranilic acid 3,4-dioxygenase,HAO)是NAD合成途径中关键调控酶。我们分别克隆、表达和纯化了枯草杆菌合成血红素的上游和中游的酶,以及西罗血红素分支合成的酶,收集了两个酶的晶体衍射数据,同时分别克隆、表达和纯化了酿酒酵母合成血红素合成下游两个酶和HAO,收集了HAO的晶体衍射数据。
参考文献
[1]Recent advances in chlorophyll biosynthesis[J].David W.Bollivar.Photosynthesis Research.2006(3)
[2]Bacterial heme biosynthesis and its biotechnological application[J].N.Frankenberg,J.Moser,D.Jahn.Applied Microbiology and Biotechnology.2003(2)
[3]Metal binding to Bacillus subtilis ferrochelatase and interaction between metal sites[J].David Lecerof,Michel N.Fodje,Román Alvarez León,Ulf Olsson,Andreas Hansson,Emma Sigfridsson,Ulf Ryde,Mats Hansson,Salam Al-Karadaghi.JBIC Journal of Biological Inorganic Chemistry.2003(4)
[4]The importance of porphyrin distortions for the ferrochelatase reaction[J].Emma Sigfridsson,Ulf Ryde.JBIC Journal of Biological Inorganic Chemistry.2003(3)
[5]范军.血红素和西罗血红素分支合成关键酶的结构生物学研究[D].中国科学技术大学,2007.