背景及概述[1]
2-(2-甲氧基-4-硝基)-3-(4-硝基)-5-(2，4-二磺基)-2H-四唑单钠盐，简称WST-8，是细胞活性检测剂CCK-8试剂盒中的一种主要成分。CCK-8试剂盒是日本Dojindo研究所开发的用于检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒。该试剂盒使用方便、灵敏度高、重复性好、无放射性。但该试剂盒价格昂贵，其主要成分WST-8市售价格高。
制备[1]
1）化合物3的制备
取化合物2(4.94g，0.0322mol)于500ml三口瓶中，加入150ml甲醇，加热搅拌至回流溶解。冷却到50℃，缓慢加入化合物1(10.0g，0.0322mol)。恒温50℃，继续搅拌2h。减压抽滤，少量甲醇洗涤，得化合物3(11.065g，0.0249mol)，收率77.4%。
1H-NMR(400MHz，D2O)δH：6.83(d，2H，J=9Hz)，7.65(dd，1H，J=8Hz，1Hz)，7.81(d，2H，J=9Hz)，7.93(d，1H，J=8Hz)，8.03(d，1H，J=1Hz)，8.31(s，1H)。
2）4-硝基-2-甲氧基重氮盐的制备
取2-甲氧基-4-硝基胺(3.7g，0.0220mol)于50ml单口瓶，-10~0℃冰浴，加入6.67ml浓盐酸用水稀释的盐酸溶液15ml。搅拌5min。然后缓慢滴加(1.64g，0.0237mol)亚硝酸钠溶于10ml水得到的溶液。加毕，继续搅拌30min。即得重氮盐溶液。备用（即制即用）。
3）化合物4的制备
取化合物3(10.0g，0.0224mol)于500ml三口瓶，加200ml甲醇，搅拌5min。然后向其中边加NaOH(3.6g，0.09mol)水溶液15ml边加上述重氮盐溶液。加毕，-10~5℃冰浴搅拌2h，室温搅拌2h，此时反应体系为墨绿色。用4ml浓盐酸用水稀释的盐酸溶液8ml调至深红色。蒸干溶剂。加入200ml石油醚超声，减压抽滤，得化合物4(12.054g，0.0193mol)，红棕色固体，收率86.2%。
1H-NMR(400MHz，D2O)δH：3.65(s，3H)，7.42(t，4H)，7.50(d，1H，J=2Hz)，7.69(d，1H，J=9Hz)，8.03(m，3H)，8.33(d，1H，J=1Hz)。
4）2-(2-甲氧基-4-硝基)-3-(4-硝基)-5-(2，4-二磺基)-2H-四氮唑单钠盐的制备
取化合物4(12.054g，0.0193mol)于500ml单口瓶，加120ml甲醇，呈深红棕色。搅拌5min。加入NBS(5.0g，0.0281mol)的丙酮溶液100ml。搅拌约1h，颜色变浅，继续搅拌直至反应体系呈黄色。减压抽滤，得黄绿色固体。重结晶（乙醇/水=2），真空干燥，得化合物2-(2-甲氧基-4-硝基)-3-(4-硝基)-5-(2，4-二磺基)-2H-四氮唑单钠盐(6.211g，0.0099mol)，浅黄色固体粉末，收率51.6%。
1H-NMR(400MHz，D2O)δH：3.54(s，3H)，7.95(m，6H)，8.13(d，1H，J=8Hz)，8.34(m，3H)；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δH：3.74(s，3H)，7.86(m，2H)，8.06(d，1H，J=2Hz)，8.14(d，2H，J=9Hz)，8.24(dd，1H，J=8Hz，2Hz)，8.30(d，1H，J=1Hz)，8.54(d，3H，J=9Hz)。
主要参考资料
[1]CN201210358733.3 2-(2-甲氧基-4-硝基)-3-(4-硝基)-5-(2，4-二磺基)-2H-四唑单钠盐的合成方法
